Knockout -alue 12 kuukautta 4 Aloita 7. joulukuuta: Aja UFO: t, räjäytä innostuneen ulkomaalaisen törmäysverkkosivuston PlayStation -blogin yli

Toisaalta C57BL/6-tietueet voitaisiin olla tunnettuja, koska sitä ei ole enemmän käytetty sisäsiitoisten laboratoriosuodatinjärjestelmien ja useimpien CRISPR-kehyslaitteiden kanssa C57BL/Sixin kanssa, koska A-resurssigenomi.Erittäin genomiset sekvenssiehdotukset luovuttaja -DNA: n rakentamiseksi voidaan hankkia tuoreen hiiren genomisekvensointikonsortion (MGSC) takia. Minkä tahansa kohdennetun asennuksen alueen on päätyttävä erittäin huolellisesti, jotta se ei häiritse mitään sääntelyelementtejä. Jopa CRISPR: n jälkeen, suurempia lisäyksiä kuin 5 kb on vaikea tuottaa rotilla.

Esimerkiksi loistavan ehdollisen poistoalleelin luomiseksi yksi pitkä SS -luovuttaja -DNA, joka sisältää floxed eksonin/s, saavat työtä tehokkaammin kuin vain kahden SGRNA: n käyttäminen LOXP -Internet -sivustojen syöttämiseen. Hiiren tsygootin todellisiin kriteereihin verrattavissa SGRNA: ien tunnistamista testataan todennäköisesti soluyhteiskunnassa, kun hiiren blastosystin arviointia varten ei tarjota (Ran et al., 2013a). Parece -kudoksella, mukaan lukien (Wang et al., 2013; Yang ym., 2013) voidaan käyttää genomimodifiointiesityksen päättämiseen ennen hoitoa, esimerkiksi koska ES -soluissa on parhaat HDR -tehokkuudet kuin pelkästään somaattiset solut (Yu et al., 2015).

Aikakertoimet

SGRNA: n tehokkuuden ohella monet muut huolet genomimodifioinnista on mahdollista kohdentamaista mutaatioista, varsinkin jos pyritään tutustumaan hiiren fenotyyppiin. Erittäin Cripsr SGRNA -rakenteen ohjelmisto antaa yhteenvedon potentiaalista kohdistaen https://suomi-casinos.com/book-of-ra/ verkkosivustoilta, joten aina kun mahdollista, PCR-riippuvainen lähestymistapa todennäköisesti tehdään, jotta ihmisten indel-mutaatiot asetetaan näissä Internet-sivustoissa kemiallisen epäsuhta-määrityksen avulla. Jalostus, jotta voit käyttää erinomaista “puhdasta” villityyppistä hiirtä, joka auttaa sinua erottamaan kaikki ei-toivotut mutaatiot (mieluiten ainakin muutama risti todennäköisesti minimoidaan osoitusmutaatioista) (Raveux et al., 2017).

2 Luo ja luo lineaarinen substraatti PCR: llä

Superovulaation ja zygootin kokoelman protokollien muutos, mutta ei, voidaan mahdollisesti tarvita käytettäessä muita haasteita (Qin et al., 2016). Oman SGRNA: n syntymä ja sinä Cas9-mRNA hiiren zygootissa voidaan suorittaa joskus sytoplasmisen laukauksen seurauksena, yleensä hauskaa hyvää pietsosta riippuvaa mikromanipulaattoria, muuten pronukleaarisilla injektioilla, yleensä mikroinjektorilla (Yang et ai., 2014). Yleensä ei havaittu fenotyyppisiä eroja, joilla on molemmat tyyppiset toimitukset (Horii et al., 2014).

Jotta nisäkkäiden kudoksessa modifioidaan genomia, tällaiset indelit lyövät geenin kehyksen siirtymän mutaation takia.Vaihtoehtoisesti, kun luovuttaja -DNA voidaan hankkia, uusi DSB voidaan korjata HDR: llä, vaikka pienemmästä tilavuudesta kuin vain NHEJ. CRISPR-CAS9 on tosiasiallisesti myöhemmin mukautettu hallussaan geneettistä hallintaa kokonaan eläimiä, kuten tuottamaan poistoa ja koputat rottia.

Rekombinointia voidaan käyttää myös hallussaan deleetioita, osiomutaatioita, päällekkäisyyksiä, inversioita, fuusioita ja merkitset. Hyvä lineaarinen DNA -substraatti, joka sisältää halutut muutokset, muuten homologiat otetaan käyttöön kohde -DNA: n lihaksesta. GAM ei ole ehdottomasti tarvitset rekombinointia varten, mutta edistää DSDNA-rekombinaation tilavuutta 20-flexiin. EXO on oikeastaan ​​suuri 5 ‘→ 3’ kaksisäikeinen DNA-spesifinen eksonukleaasi, jota tarvitaan dsDNA-rekombinaatioon. Uusi beetaproteiini, hyvä ssDNA: n hehkutus terveeksi proteiinille, on keskimmäinen rekombinaasi rekombinaation sisällä. Erityisesti isäntärekombinaatiopalvelut, esimerkiksi salaiset rekombinaatioproteiinit, eivät tarvitse rekombinointia varten.

LOXP -sivuston järjestelyn suhteen tuore rekombinaatio tuottaa omien osoitegeeneidesi poistamisen tai käännökset. Cre-LOXP: n indusoitavan luonteen vuoksi toksiinit indusoivat tuoretta lyöntiä, mukaan lukien tetrasykliini ja voit tamoxifaania. Tetrasykliinin tila laukaisee upouusi CRE -rekombinaasitranskription, kun taas Tamoxifane on vastuussa atomien kuljetuksista. Jälkevät alukkeet tekevät tuotteesta tai palvelusta, jossa Indel sijaitsee epäsymmetrisesti uudessa PCR -työkalussa. Tämän jälkeen T7E1 -entsyymi (WT – villityyppi; HT – heterotsygoottinen) pilkotaan yksi epäsuhta, jotta pari pienempiä fragmentteja saadaan A -agaroosigeeliin.

Kun Olivares muuttaa ylävartalonsa päästäkseen Castillon oikean puolen uusimpaan taisteluun, Castillo’s Overhand -sovellukset ovat A-kehyksenä, jotta Olivares ei ole alussa. Fysiikkaan sijoitettuun Castillo jättää innokkaan yläosan tuottamaan tilaa, jotta ne voivat pilata ulos taisteluista, nollaamalla hyvään pituuteen. Mutta ei aina kun Olivares ei kyennyt pääsemään taisteluun hänen ensisijaiselle etupuolelle, heidän kykynsä pitää hauskaa jäljellä olevalla yhteydellä ovat vakavasti vähentyneet.

Ja suuret deleetiot, korkeat genomiset insertiot ovat samaan aikaan osoittautuneet, että on mahdollista pitää hauskaa CRISPR: n kanssa (Zhang et al., 2015). Kaksinkertaisten SGRNA: ien injektiot ovat ihanteellisia keinona parantaa uusimman geenin todennäköisyyttä, johon keskittyy, etenkin kun bi-adelic-geenimodifikaatiota todella toivotaan (Zhou et al., 2014). Osoituksen ulkopuoliset mutaatiot paljastettiin pääasiassa omistavan CRISPR-genomin modifiointia ihmisen sairauskudoksiin, mutta ne voivat tulla harvinaisiksi suuressa hiiren zygootissa (Fu et al., 2013; Yang et al., 2013). Siitä huolimatta, osoituksen ulkopuoliset mutaatiot ovat kuitenkin jotain, kun tarkastellaan geneettisesti suunnitellut hiiret. Yksi Cas9N -leimaus johtaa yksinkertaisesti yksittäiseen säikeiden taukoon, joka on helposti korjattu; Joten aito DSB: n tuottamiseksi tarvitaan muutama sGRNA. CRISPR-Cas9-tekniikka on suurelta osin korvannut geenin, joka keskittyy ES-kudoksen sisäpuolelle, koska genomin modifiointia koskevat keinot, mukaan lukien helpon suunnittelun ja lyhyemmän poistumisen seurauksena, tarvitaan valmistajien hiirten saamiseksi.

• Koska Duran kaupungit päähänsä Palominon etureunasta, Palomino kamppailee oikean koukun päähän.
• Keen -ECORI -sivusto unohdetaan luovuttaja -DNA: n asettamisessa, jotta voit sallia oman CRISPR -tuottaman Knockin -hiiren genotyypin määrittämisen, jossa ki pcr -rengas ei leikata LSO: n takia.
• Korkeat insertiot muuten deleetiot, mutta eivät, saattavat vaatia muutamia SGRNA: ita kokonaan keston genomista DNA: ta pitkin, kun kummankin muuten poistettu.
• Ehdollisia hiirikuvioita suositaan ihmisten tilan tutkimuksessa, koska toiset osoittavat samankaltaisuuden fenotyypissä, kun olet tietyt perheen geenit poistettu.
• CRISPR: n kanssa leikkivät 1 – DOS KB: n insertit, mutta HDR: n suorituskyky vähenee pohjimmiltaan, koska uusimpien pääsyosuuksien mittaukset kehittyvät sen yli, joten se kesto.

CAS9: n DNA: n endonukleaasikapasiteetin lisäksi CRISPR on myös asetettu uudelleen lisäämään innokas RNA: n suunnattu funktio ohjaamaan suunnatun genetiikan uutta transkriptionaalista kiinnostusta. Tämä voidaan saavuttaa hauskanpitoon hienolla deaktivoidulla CAS9: llä (DCAS9), joka on sulatettu, jotta voit transkriptionaaliset aktivaattorit, repressorit ja voit epigeneettisiä muokkaimia (Komor ym. 2017). Pikemminkin kohdegeenin aktivaatio, jolla on hullua tyyppiä CAS9: tä, voidaan saavuttaa pelaamalla modifioituilla elottomilla SGRNA: lla, jotka on suunniteltu MS2 -hiusneula -aptameereilla.Nämä elottomat SGRNA: t pelkistetään lopettamaan DSB -muodostuminen, kun MS2 -aptameerit palkkaavat sekoitusproteiinit, jotka koostuvat uusimmasta MS2 -bakteriofagikarusta, joka tarvitaan transkriptionaaliseen aktivaattoriin liittyvän proteiinin tarvittavasta proteiinista (Liao et al 2017). Se käsittelee geenin aktivointimenetelmää on osoitettu hiirten sisällä auttamaan sinua työntämään suunnattua termiä pois geeneistä, jotka on tunnustettu lievittämään sairauksia, kuten diabeteksen, munuaisten kunto ja lihasdystrofia.

Tämän tyyppinen geeni, joka keskittyy prosessiin, samoin kuin CRISPR-Cas9-tekniikan lopulliseen kehitykseen, nopeammin kasvattaa geneettisesti suunnitellut hiiret 8-päivään 90 päivään. CRISPR-Cas9-tekniikka, mutta ei, on periaatteessa korvaavat ZFN: t ja voit talons helpon kehyksen suhteen ja kehys (kuva 1).ZFN: t ja Talens vaativat kokoonpanon pois multimeeriset DNA: n sitoutumisdomeenin nimet jokaiselle tuoreesta genomisesta kohteesta. CRISPR riippuu ribonukleoproteiinin huippuluokan muodostumisesta, joka sisältää DNA-endonukleaasi CAS9: n ja erinomaisen ”opas” RNA One -sovelluksen ohjaamaan, missä hyvä genominen DSB pelaaminen tapahtuu 20BP: n suhteen alistuneen sarjan koordinointiin.